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l'ADN de LOUIS XVII PROUVE QU'IL EST BIEN LE FILS DE LOUIS XVI !
Dim 3 Mar - 22:17
Louis XVII est bien le fils de Louis XVI et Marie Antoinette : L’ADN a parlé
Article de recherche « International Journal of Sciences » Volume 8 - Février 2019 (02)(pour les tableaux et figures citées voir l’original en anglais sur le site https://www.ijsciences.com/pub/issue/2019-02/
Le profil des STR du chromosome Y de Louis XVII (traduit de l’anglais par C Crépin)
(1785-1795?)
Gérard Lucotte 1, Christian Crépin 2, Thierry Thomasset 3
1- Institut d’Anthropologie Moléculaire, 75005 Paris, France
2 -15 Bd de la Pierre Blanche, 11000 Carcassone, France
3 -Service d’analyse physico-chimique, UTC, 50201, Compiègne, France
Résumé: Nous avons étudié par SEM-EDX des cheveux d’une mèche de cheveux du roi de France Louis XVI et des enfants de la reine Marie-Antoinette. Parmi ces cheveux, le numéro trois des cheveux blonds est recouvert de cellules de peau et de pellicules. L'haplogroupe des pellicules de ces cheveux est celui de Marie-Antoinette; Le profil Y-STR de ces cheveux est celui de Louis XVI, connu auparavant. Il s’agit donc d’un cheveu de Louis XVII, l’un des fils de Louis XVI.
Mots-clés: Profil STR des chromosomes Y, Louis XVII, paternité du roi Louis XVI
Louis-Charles (né en 1785) est le deuxième fils du roi de France Louis XVI (1754-1793) et de la reine Marie-Antoinette (1755-1793). Louis-Charles fut proclamé Louis XVII, roi de France, immédiatement après la mort de son père. Auparavant (Lucotte et C Crépin al., 2015), nous avons comparé la séquence d’ADN mitochondrial (ADN mt¬) obtenue à partir des cheveux authentiques de Louis XVII à celle de Marie-Antoinette; mais, jusqu’à présent, nous n’avions pas pu obtenir le profil Y-STR de Louis XVII (marqueurs d’ADN à répétition tandem courte du chromosome Y). Dans la présente étude, nous trouvons - sur un autre matériau capillaire - le profil Y-STR de Louis XVII et nous le comparons à celui de Louis XVI que nous avons récemment publié (Lucotte et al., 2016).
Matériaux et méthodes Matériaux
Le 26 juin 2011, les frères de Baudreuil présentent deux objets provenant de leur patrimoine au bureau de Rouillac (Cheverny, France) (Figure 1): I: un anneau en or de la reine Marie-Antoinette, entouré de ses cheveux; II: une lettre pliée, avec des inscriptions. La bague a été conservée dans une boîte où on peut lire l'inscription suivante: «Cheveux de la Reine Marie Antoinette» »(Cheveux de la reine Marie Antoinette),« Bague donnée par la Reine en 1792 à la Mise de Soucy née de Makau Sous -Gouvernante des Enfants de France »(bague donnée par la reine en 1792 à la marquise de Soucy née de Makau sous-gouvernante des Enfants de France). Renée-Suzanne-Marie Louise de Mackau (1758-1841) était sous-gouvernante des enfants de la France en 1780.
Laure-Adélaïde-Louise de Fitte de Soucy épousa en 1863 Emile-Alexandre-Louis de Baudreuil, et les frères de Baudreuil sont, aujourd'hui, les descendants de ce couple. Laure-Adélaïde-Louise de Fitte de Soucy était une fille de Philippe-Babolin de Fitte de Soucy (1807-1843), lui-même fils de Louis-Xavier de Fitte (1775-1840), marquis de Soucy. Louis-Xavier de Fitte était le fils aîné de François-Louis de Fitte (1751-1793) et de Renée-Suzanne-Marie-Louise de Mackau.
À la surface de la lettre pliée (Figure 2), on peut voir l'inscription suivante: «Cheveu des Augustes enfants de France». Dans le papier déplié de la lettre se trouve une mèche de cheveux, attachée avec un fil vert.
Techniques de microscopie.
Les cheveux et autres objets ont été examinés en micrographie stéréoscopique confocale.
La microscopie électronique a été réalisée par microscopie électronique à balayage (MEB) avec le modèle Philips XL30 (version environnementale). Les procédures GSE et BSE ont été utilisées, la dernière permettant de détecter des éléments lourds. Les cheveux blonds numéro 3 ont été examinés avec un autre microscope électronique (SEM-2), le modèle FEI modèle Quanta 250f FEG; c'était la procédure LFD qui a été utilisée.
Des analyses élémentaires pour chaque objet ont été réalisées sur SEM-1 par microfluorescence aux rayons X (XRMF), ce microscope étant équipé d'un rayon X Bruker AXS Energy Dispersive (EDX); le système d'analyse est PGT (Spirit Model, de Princeton Gamma Technology). Chaque analyse élémentaire est donnée sous forme de spectre, avec kiloélectrons / Volts (ke / V) en abscisse et les hauteurs des éléments en ordonnées.
Cet article est publié selon les termes de la licence Creative Commons Attribution 4.0 les Auteurs conservent les droits d'auteur de cet article. Droits de publication avec Alkhaer Publications. Publié à: http://www.iisciences.com/pub/issue/2019-02/
DOI: 10.18483 / ijSci.1899; ISSN en ligne: 2305-3925; ISSN d'impression: 2410-4477
Techniques d'ADN
L'ADN génomique a été extrait (Lucotte,2010) des cheveux blonds numéro 3 en utilisant une méthode standard (EDTA 0,5 M, sarcosyl 20% et protéinase K 10 mg / ml) et purifié à l'aide d'un kit commercial (Kit NucleoSpin +; Macherey-Nagel, Duren, Allemagne) conformément aux instructions du fabricant. (Nota : ici le professeur Lucotte a voulu dire qu’il a appliqué la méthode qu’il avait utilisé pour Napoléon en 2010)
À partir de cet ADN génomique extrait, nous obtenons les intervalles de séquence mt- ADN pour HVR1 et HVR2 (régions hypervariables 1 et 2) par PCR (réaction de polymérisation en chaîne) avec les amorces F15971 et R16410 et avec les amorces L15 et H484, respectivement. Les produits de PCR ont été purifiés à partir de gel d'agarose. Les deux brins des fragments d'ADN de mt amplifiés retirés ont été directement séquencés (kit de séquençage à cycle Big Dye Terminator; Applied Biosystems).
À partir de l'ADN génomique extrait, nous avons amplifié 16 Y-STR en utilisant le kit d'amplification PCR AmpFirst Identifier (Amp FIRSTY filer TM, Applied Biosystems), conformément aux instructions données par la société; ce kit d'amplification est spécialement adapté à l'étude de l'ADN ancien.
RÉSULTATS
1. Le papier de la lettre.
Le coin du papier situé dans la partie supérieure droite du déplié de la lettre a été coupée pour analyse. Examiné en microscopie optique (figure 3), il est de couleur verte. Une partie de celle-ci, examinée par SEM (en GSE), à un grossissement de x100, montre qu’elle est composée d’un sous-bois de fibres végétales intactes.
Le spectre global de cette partie montre des pics élevés (de carbone et d'oxygène) correspondant à une matière organique. La figure 4 montre la photographie au MEB d'une partie d'une telle fibre; il correspond à une fibre textile de lin (fibre cylindrique, d'environ 20 pm d'épaisseur, dont la surface lisse présente des nœuds caractéristiques régulièrement espacés). L'analyse élémentaire de cette fibre montre un spectre similaire à celui du spectre global du papier.
Ce papier est un «papier-chiffon», une sorte de papier de luxe qui était utilisé dans le passé pour la rédaction des documents officiels et fiduciaires. La présence de soufre, de potassium et d'aluminium dans les spectres suggère qu'alun (un sulfate double de potassium hydraté), de formule chimique: KAl (SO4) 2, 12H20 a été utilisé comme mordant pour colorer le papier avec une certaine coloration organique verte.
2. L'encre de l'inscription en papier.
La figure 5 montre des vues agrandies (en microscopie optique et électronique) de la partie supérieure de la lettre terminale s du mot écrit «des». Le spectre de la substance blanche (observée dans l'ESB) situé à cet endroit (Figure 6) montre que les particules brillantes correspondantes sont riches en soufre et en fer.
Cela indique que l'encre est une «encre ferro-gallique», les particules de sulfate de fer ont ajouté du noircissement à la noirceur de la matière organique constituant l'encre. Cette sorte d'encre ferro-gallique était couramment utilisée en Europe (du Moyen Âge à la fin du 18ème siècle et même après).
3. Le fil vert autour de la mèche de cheveux. La figure 7 montre une vue optique agrandie de la mèche de cheveux. Il existe deux types de coloration des cheveux: les cheveux blonds et les cheveux roux. Ces deux types de cheveux sont enroulés (et attachés) avec un fil vert.
La figure 8 montre différents aspects des fibres constituant un tel fil. De couleur verte, les fibres sont longues et cylindriques, d'épaisseur régulière. La photographie SEM inférieure de la figure montre une extrémité de fibre, avec une extrémité bi-triangulaire caractéristique d'une fibre de soie. La figure 9 montre une partie d'une telle fibre (de 16 pm d'épaisseur) qui est lisse. Le spectre correspondant montre un pic principal de carbone, un petit pic d’oxygène et un très petit pic de soufre (ce dernier élément organique étant caractéristique de la soie).
Mais ce sont aussi de petits pics d’aluminium et de soufre dans le spectre. Comme pour le papier, la couleur verte des fibres de soie est due à un pigment vert organique lié à la soie par le mordant alun.
4. Les cheveux de la mèche.
Trois cheveux de chaque couleur ont été prélevés dans la mèche (Figure 10). Les figures suivantes résument les résultats obtenus concernant les cheveux les plus longs pour chaque catégorie.
La figure 11 montre les deux extrémités du cheveu roux numéro 1; elles correspondent à un cheveu coupé (la direction des échelles de point de chaque rangée permet d’orienter le cheveu). La photo SEM-1 de la figure 12 montre la partie médiane du cheveu, où l'épaisseur est de 65,5 pm. Sur cette photo, on peut voir que la distance moyenne entre les rangées d'échelles est d'environ 17 heures, caractéristique des cheveux humains (la surface des cheveux est recouverte de particules minérales). Le spectre montre les caractéristiques des pics de la composition des cheveux: deux pics (de matière organique) correspondant au carbone et à l'oxygène, un très petit pic d'azote et un pic constant de soufre (ponts de disulfure de la kératine); il y a du chlore et le sodium, correspondant au sel (ClNa) de la sueur. Un exemple de dépôt minéral sur la surface du cheveu est illustré à la figure 13; son spectre est celui d'une particule riche en fer (argile) à base d'alumine-silicate. Un nombre total de trente-deux de ces particules sont déposées à la surface des cheveux. La photographie de la figure 14 montre un autre exemple d'un autre type de dépôt de minéraux à la surface des cheveux; son spectre montre un pic principal relativement élevé de calcium (il s'agit donc de la calcite ou d'une autre forme de carbonate de calcium). Nous avons trouvé un nombre total de onze particules de ce type à la surface des cheveux. La figure 15 montre un exemple de partie de corps d'acari adhérant à la surface du cheveu (quatre de ces coquilles - ou fragments de coquille - ont été trouvées collées aux écailles). La surface du cheveu est multi-parasitée, car nous observons à la surface un embrayage d’arthropodes. Nous avons des preuves que ce type de cheveux a été traité avec du sulfate de fer (Figure 16), un produit phytosanitaire communément utilisé de formule chimique FeSO4. Nous avons également observé au moins quatre échantillons de Cyanophyca (Figure 17) parasitant la surface du cheveu.
La figure 18 montre les extrémités coupées du cheveu blond numéro 1. La photographie SEM-1 et le spectre de la figure 19 montrent que ce cheveu est, par son aspect et sa composition, un cheveu humain typique. Son diamètre dans la partie médiane est de 56,2 heures. Exploration de sa surface montre seulement deux particules d'argile et une particule de carbonate de calcium (nous ne trouvons aucun produit de sulfate de fer). La figure 20 montre une cellule cutanée adhérente, de même composition chimique que celle des squames du cheveu (mais se différenciant par une teneur en soufre relative inférieure et par la présence de phosphore). Un exemple de micel de savon est présenté sur la photographie au MEB de la figure 21 (sa composition est principalement composée de carbone et d'oxygène); nous avons trouvé six échantillons d'un tel produit à la surface des cheveux, ce qui atteste que ces cheveux ont été intensément lavés, savonnés et nettoyés. La photographie de la figure 22 montre un exemple d'un ensemble de particules métalliques (de sulfure d'argent, avec des traces de cuivre) qui sont chargées à la surface des cheveux (quatre ensembles d'un tel produit ont été trouvés). Cela atteste que les cheveux étaient finement argentés après le lavage. La figure 23 montre l'exemple unique d'un ensemble d'au moins trois particules (à contours angulaires) situées à la surface du cheveu. Comme ces structures sont très résistantes à un faisceau de rayons X intense (à la puissance maximale de l'appareil SEM) et que leurs compositions chimiques sont principalement de carbone, ce sont probablement des particules de micro-éclats de diamant.
Ainsi, les deux cheveux sont coupés; les deux sont similaires en aspect et en composition chimique, caractéristiques des cheveux humains. Le tableau 1 montre les points principaux par lesquels ils diffèrent.
Tableau 1: Principales différences entre les deux cheveux.
Cheveux roux Cheveux blonds
Epaisseur 65.5 μm 56.2 μm
Dépôts sur les écailles nombreux Un peu
Nombre de particules d’argile 32 2
Nombre de particules de carbonate de de calcium 11 1
Nombre de cellules de la peau aucune 1
Nombre d''acariens 4 aucun
Nombre d’embrayages d’insectes 1 aucun
Nombre de Cyanophycaes 4 aucun
Nombre de particules de FeSO4 6 aucun
Nombre de micels de savon aucun 6
Nombre de particules métalliques de sulfure d’argent aucun 4
Ensemble de micro-éclats de diamant aucun 3
Les deux sortes de cheveux emmêlés dans la mèche se différencient par leurs préparations: tandis que les cheveux blonds étaient soigneusement savonnés et lavés, puis décorés avec des matériaux précieux, les cheveux roux sont plus «indigènes» - car plus recouverts d'argile et de minéraux de carbonate de calcium et constituent une matière sale; les cheveux sont recouverts de restes d'arthropodes et infectés par certains Cyanophycaes (du sulfate de fer a été utilisé pour le traiter). Ces deux sortes de poils (poils rouges non lavés et poils blonds lavés et décorés) étaient en outre empêtrés dans la mèche de cheveux que nous observons.
Les figures suivantes montrent les cellules de la peau et les pellicules trouvées sur la surface du cheveu blond numéro 3. Ce cheveu, précédemment étudié, s'est révélé particulièrement riche en ces formations; ainsi, une procédure spéciale (sur SEM-2, dans LFD, 2400x) a été utilisée pour l’analyser plus précisément.
La figure 24 montre les premières cellules de peau trouvées; de taille relativement grande (environ 30 pm de longueur maximale), ces cellules sont aplaties et pliées longitudinalement. Leurs compositions sont à peu près les mêmes que celles des écailles des cheveux, mais avec du phosphore et une proportion relativement plus faible de soufre. La figure 25 montre les premières pellicules trouvées; De composition semblable à celle des cellules de la peau, il a une taille plus petite, une surface bombée et des contours bien délimités. Figure26 montre la deuxième pellicule observée, et la figure 27 les aspects des deux pellicules suivantes trouvés. L’exploration complète de la surface numéro 3 des cheveux blonds nous permet de détecter une trentaine de pellicules dessus.
Contrairement aux cellules de la peau, les pellicules sont des cellules multinucléées contenant des quantités appréciables d'ADN nucléaire et cytoplasmique (Lucotte et Bouin Wilkinson, 2014). C'est la raison pour laquelle nous avons extrait l'ADN génomique de l'ensemble des cheveux blonds, numéro 3.
5. ADN des cheveux blonds numéro 3.
Nous avons obtenu environ 39 ng d’ADN génomique à partir du numéro 3 des cheveux blonds. La procédure de détection des mutations de l’ADNmt a été répliquée deux fois. Le tableau 2 résume les résultats obtenus.
Tableau 2: Détection de mutations d'ADNmt.
Present study Lucotte et al., 2015
HVR1 sequence Pas de mutation Pas de mutation
HVR2 sequence 152C, 194T, 263G, 315.1C 152C, 194T, 263G, 315.1C
Il n'y a pas de mutation dans la séquence HVR1 et quatre mutations (152C, 194T, 263G et 315.1C) dans la séquence HVR2; ces mutations sont les mêmes que celles trouvées précédemment (Lucotte et c Crépin al., 2015) dans les autres cheveux authentiques de Louis XVII. Cette combinaison (parfois appelée à tort «l'haplotype des Habsbourg») a été initialement trouvée (Jehaes et al., 2001) chez certains descendants deMarie-Antoinette (notamment pour la reine Anna de Roumanie : Ici le professeur Lucotte a voulu dire des descendants de Marie Thérèse d’Autriche mais pas Marie Antoinette).
Nous avons récemment (Lucotte, en préparation) établi (pour les cheveux authentiques de Marie-Antoinette, conservés dans un médaillon) que l’haplogroupe d’ADNt correspondant est vraiment celui qui appartient à la reine Marie-Antoinette. La consultation de banques de données récentes a montré que cet haplogroupe d'ADNmt est rare (il a été trouvé chez moins de vingt sujets dans le monde).
La procédure de détection du profil Y-STR a également été répliquée deux fois. Le tableau 3 résume les résultats obtenus concernant ce profil.
Tableau 3. Détection des valeurs d'allèle pour quinze Y-STR.
Y-STRs Allele values
Present study Lucotte et al., 2016
DYS19 14 14
DYS385.a 11 11
DYS385.b 14 14
DYS389.I 14 14
DYS389.b 16 16
DYS390 23 23
DYS391 11 11
DYS392 13 13
DYS393 13 13
DYS438 12 12
Y-GATA-A4 13 13
DYS448 19 19
DYS456 16 16
DYS458 18 18
Y-GATA-C4 23 ?
Y-GATA-H4 12 12
Les valeurs d'allèle sont identiques pour quatorze Y-STR. Cela confirme que Louis XVII est vraiment le fils de Louis XVI.
DISCUSSION ET CONCLUSION
Nous avons travaillé sur une mèche de cheveux conservée dans une lettre qui, accompagnée d’une bague enchevêtrée avec les cheveux de Marie-Antoinette, a été donnée à la marquise de Soucy (née de Makau). La lettre a été transmise par héritage au à la descendance des Soucy d’aujourd'hui.. Les analyses SEM-EDX du papier à lettres ont montré qu’il s’agissait d’un type particulier de "papier mousseline ”, constituée principalement de fibres de lin; l'encre de l'inscription sur le papier était une sorte particulière d'encre à base de ferro-gallic. Ces deux matériaux sont compatibles avec ceux d'une lettre écrite au 18ème siècle.
La mèche de cheveux conservée dans la lettre est entourée et attachée par un précieux fil de soie verte. Il y a deux sortes de poils dans la mèche concernant la couleur: les cheveux roux et les cheveux blonds. Cela indique que la mèche de cheveux est constituée par les cheveux de deux sujets différents.
Les deux types de cheveux diffèrent aussi par leurs diamètres: une épaisseur de 65,5 μm pour un cheveux roux (les cheveux rouges numéro 1 étant pris pour exemple) et de 56,2 μm pour un cheveux blonds (cheveux blonds numéro 1 étant pris comme exemple). ). Le diamètre principal d'un cheveu adulte normal est d'environ 80 μm (Deedrick et Koch, 2014), et la dessiccation (comme pour les cheveux étudiés ici) n'est responsable que d'une réduction limitée de cette épaisseur. Une épaisseur de cheveux de 65,5 μm (correspondant à l'augmentation normale du diamètre des cheveux pendant la croissance) est évocatrice de celle d'un adolescent, et une épaisseur de cheveux de 56,2 μm de celle d'un sujet plus jeune.
La différenciation de couleur de cheveux, en soi, doit également être prise en compte: nous savons que la couleur des cheveux du jeune Louis-Charles était blonde, tandis que sa sœur aînée Marie-Thérèse (1778-1851) avait les cheveux roux, ou plus exactement (tout comme sa mère, Marie-Antoine) «blond-cendre»
.
Les deux types de coloration des cheveux sont également importants à considérer. Nous pensons que ces deux colorations ne correspondent qu’à deux sujets (l’inscription au pluriel «Cheveux des Augustes enfants de France» indique qu’ils n’étaient que deux), dont les cheveux sont dans la mèche: ces deux sujets sont Louis-Charles et Marie-Thérèse Le premier dauphin Louis-Joseph (né en 1781) est décédé en 1789 et le dernier enfant Sophie (née en 1786) est décédé un an après. Comme Marie-Antoinette avait donné l'anneau (et les cheveux) à Renée de Soucy en 1792, les deux enfants survivants étaient en vie à ce moment-là.
Nous avons établi que, contrairement aux cheveux roux, les cheveux blonds étaient soigneusement préparés (lavés, savonnés et décorés); ces deux sortes de cheveux étaient, en second lieu, entrelacées dans la mèche. Il s’agit d’un ancien processus habituel d’embrassement des cheveux chez les personnes qui sont étroitement liées affectivement et / ou familièrement; par exemple (Lucotte et al., 2016), nous avons observé que les cheveux de Louis XVI et ceux de son épouse Marie-Antoinette sont ainsi entrelacées dans la mèche de cheveux étudiée.
Nous avons observé que les cheveux blonds numéro 3 sont particulièrement chargés de cellules cutanées et de pellicules étroitement liées à leur surface. Une quantité suffisante d'ADN en a été extraite; les mutations d’ADNt détectées correspondent à un haplogroupe d’ADNt identique à celui obtenu à partir des cheveux authentiques d’un autre Louis XVII (Lucotte et C Crépin al., 2015) et de Marie-Antoinette.
Le profil Y-STR obtenu est strictement identique à celui de Louis XVI (Lucotte et al., 2016). Ceci établit que Louis XVI est le père biologique de Louis XVII.
Depuis le début, de nombreuses rumeurs ont mis en doute la paternité de ses enfants par Louis XVI. Nous démontrons ici que Louis-Charles (Louis XVII) est vraiment le fils de Louis XVI.
Remerciements
Nous remercions les frères de Baudreuil qui nous ont permis d’étudier la mèche de cheveux, et Arnaud de Genlis pour sa généalogie complète de la famille de Soucy. Cette étude fait partie de notre programme de recherche sur les enquêtes génétiques mis au point à l’Institut d’anthropologie moléculaire (Paris) concernant les familles royales en France.
Références
1. D.W. Deedrick et S.L. Koch (2014). Microscopie des cheveux, Partie 1: Guide pratique et manuel sur les cheveux. Forensic Science Communications, 6: 1-45.
2. E. Jehaes, H. Pfeiffer, K. Toprak, R. Decorte, B. Brinkmann et J.J. Cassiman (2001). Analyse ADN mitochondriale du cœur putatif de Louis XVII, fils de Louis XVI et de Marie-Antoinette. European Journal of Human Genetics, 9: 185-190.
3. G. Lucotte (2010). Une variante rare de la séquence de l’ADNmt HVS1 dans les cheveux de la famille de Napoléon. Investigative Genetics, 1 (7): 1 -6.
4. G. Lucotte et A. Bouin Wilkinson (2014). Un profil STR autosomique de Napoléon Ier. Open Journal of Genetics, 4: 292-299.
5. G. Lucotte, T. Thomasset et C. Crepin (2015). Le mitotype d'ADN mitochondrial de Louis XVII (1785-1795?). Journal international des sciences, 4 (11): 10-18.
6. G. Lucotte, T. Thomasset et S. Wen (2016). Le profil ADN Y-STR de Louis XVI (1754-1793). International Journal of Sciences, 5 (04): 68-93.
Article de recherche « International Journal of Sciences » Volume 8 - Février 2019 (02)(pour les tableaux et figures citées voir l’original en anglais sur le site https://www.ijsciences.com/pub/issue/2019-02/
Le profil des STR du chromosome Y de Louis XVII (traduit de l’anglais par C Crépin)
(1785-1795?)
Gérard Lucotte 1, Christian Crépin 2, Thierry Thomasset 3
1- Institut d’Anthropologie Moléculaire, 75005 Paris, France
2 -15 Bd de la Pierre Blanche, 11000 Carcassone, France
3 -Service d’analyse physico-chimique, UTC, 50201, Compiègne, France
Résumé: Nous avons étudié par SEM-EDX des cheveux d’une mèche de cheveux du roi de France Louis XVI et des enfants de la reine Marie-Antoinette. Parmi ces cheveux, le numéro trois des cheveux blonds est recouvert de cellules de peau et de pellicules. L'haplogroupe des pellicules de ces cheveux est celui de Marie-Antoinette; Le profil Y-STR de ces cheveux est celui de Louis XVI, connu auparavant. Il s’agit donc d’un cheveu de Louis XVII, l’un des fils de Louis XVI.
Mots-clés: Profil STR des chromosomes Y, Louis XVII, paternité du roi Louis XVI
Louis-Charles (né en 1785) est le deuxième fils du roi de France Louis XVI (1754-1793) et de la reine Marie-Antoinette (1755-1793). Louis-Charles fut proclamé Louis XVII, roi de France, immédiatement après la mort de son père. Auparavant (Lucotte et C Crépin al., 2015), nous avons comparé la séquence d’ADN mitochondrial (ADN mt¬) obtenue à partir des cheveux authentiques de Louis XVII à celle de Marie-Antoinette; mais, jusqu’à présent, nous n’avions pas pu obtenir le profil Y-STR de Louis XVII (marqueurs d’ADN à répétition tandem courte du chromosome Y). Dans la présente étude, nous trouvons - sur un autre matériau capillaire - le profil Y-STR de Louis XVII et nous le comparons à celui de Louis XVI que nous avons récemment publié (Lucotte et al., 2016).
Matériaux et méthodes Matériaux
Le 26 juin 2011, les frères de Baudreuil présentent deux objets provenant de leur patrimoine au bureau de Rouillac (Cheverny, France) (Figure 1): I: un anneau en or de la reine Marie-Antoinette, entouré de ses cheveux; II: une lettre pliée, avec des inscriptions. La bague a été conservée dans une boîte où on peut lire l'inscription suivante: «Cheveux de la Reine Marie Antoinette» »(Cheveux de la reine Marie Antoinette),« Bague donnée par la Reine en 1792 à la Mise de Soucy née de Makau Sous -Gouvernante des Enfants de France »(bague donnée par la reine en 1792 à la marquise de Soucy née de Makau sous-gouvernante des Enfants de France). Renée-Suzanne-Marie Louise de Mackau (1758-1841) était sous-gouvernante des enfants de la France en 1780.
Laure-Adélaïde-Louise de Fitte de Soucy épousa en 1863 Emile-Alexandre-Louis de Baudreuil, et les frères de Baudreuil sont, aujourd'hui, les descendants de ce couple. Laure-Adélaïde-Louise de Fitte de Soucy était une fille de Philippe-Babolin de Fitte de Soucy (1807-1843), lui-même fils de Louis-Xavier de Fitte (1775-1840), marquis de Soucy. Louis-Xavier de Fitte était le fils aîné de François-Louis de Fitte (1751-1793) et de Renée-Suzanne-Marie-Louise de Mackau.
À la surface de la lettre pliée (Figure 2), on peut voir l'inscription suivante: «Cheveu des Augustes enfants de France». Dans le papier déplié de la lettre se trouve une mèche de cheveux, attachée avec un fil vert.
Techniques de microscopie.
Les cheveux et autres objets ont été examinés en micrographie stéréoscopique confocale.
La microscopie électronique a été réalisée par microscopie électronique à balayage (MEB) avec le modèle Philips XL30 (version environnementale). Les procédures GSE et BSE ont été utilisées, la dernière permettant de détecter des éléments lourds. Les cheveux blonds numéro 3 ont été examinés avec un autre microscope électronique (SEM-2), le modèle FEI modèle Quanta 250f FEG; c'était la procédure LFD qui a été utilisée.
Des analyses élémentaires pour chaque objet ont été réalisées sur SEM-1 par microfluorescence aux rayons X (XRMF), ce microscope étant équipé d'un rayon X Bruker AXS Energy Dispersive (EDX); le système d'analyse est PGT (Spirit Model, de Princeton Gamma Technology). Chaque analyse élémentaire est donnée sous forme de spectre, avec kiloélectrons / Volts (ke / V) en abscisse et les hauteurs des éléments en ordonnées.
Cet article est publié selon les termes de la licence Creative Commons Attribution 4.0 les Auteurs conservent les droits d'auteur de cet article. Droits de publication avec Alkhaer Publications. Publié à: http://www.iisciences.com/pub/issue/2019-02/
DOI: 10.18483 / ijSci.1899; ISSN en ligne: 2305-3925; ISSN d'impression: 2410-4477
Techniques d'ADN
L'ADN génomique a été extrait (Lucotte,
À partir de cet ADN génomique extrait, nous obtenons les intervalles de séquence mt- ADN pour HVR1 et HVR2 (régions hypervariables 1 et 2) par PCR (réaction de polymérisation en chaîne) avec les amorces F15971 et R16410 et avec les amorces L15 et H484, respectivement. Les produits de PCR ont été purifiés à partir de gel d'agarose. Les deux brins des fragments d'ADN de mt amplifiés retirés ont été directement séquencés (kit de séquençage à cycle Big Dye Terminator; Applied Biosystems).
À partir de l'ADN génomique extrait, nous avons amplifié 16 Y-STR en utilisant le kit d'amplification PCR AmpFirst Identifier (Amp FIRSTY filer TM, Applied Biosystems), conformément aux instructions données par la société; ce kit d'amplification est spécialement adapté à l'étude de l'ADN ancien.
RÉSULTATS
1. Le papier de la lettre.
Le coin du papier situé dans la partie supérieure droite du déplié de la lettre a été coupée pour analyse. Examiné en microscopie optique (figure 3), il est de couleur verte. Une partie de celle-ci, examinée par SEM (en GSE), à un grossissement de x100, montre qu’elle est composée d’un sous-bois de fibres végétales intactes.
Le spectre global de cette partie montre des pics élevés (de carbone et d'oxygène) correspondant à une matière organique. La figure 4 montre la photographie au MEB d'une partie d'une telle fibre; il correspond à une fibre textile de lin (fibre cylindrique, d'environ 20 pm d'épaisseur, dont la surface lisse présente des nœuds caractéristiques régulièrement espacés). L'analyse élémentaire de cette fibre montre un spectre similaire à celui du spectre global du papier.
Ce papier est un «papier-chiffon», une sorte de papier de luxe qui était utilisé dans le passé pour la rédaction des documents officiels et fiduciaires. La présence de soufre, de potassium et d'aluminium dans les spectres suggère qu'alun (un sulfate double de potassium hydraté), de formule chimique: KAl (SO4) 2, 12H20 a été utilisé comme mordant pour colorer le papier avec une certaine coloration organique verte.
2. L'encre de l'inscription en papier.
La figure 5 montre des vues agrandies (en microscopie optique et électronique) de la partie supérieure de la lettre terminale s du mot écrit «des». Le spectre de la substance blanche (observée dans l'ESB) situé à cet endroit (Figure 6) montre que les particules brillantes correspondantes sont riches en soufre et en fer.
Cela indique que l'encre est une «encre ferro-gallique», les particules de sulfate de fer ont ajouté du noircissement à la noirceur de la matière organique constituant l'encre. Cette sorte d'encre ferro-gallique était couramment utilisée en Europe (du Moyen Âge à la fin du 18ème siècle et même après).
3. Le fil vert autour de la mèche de cheveux. La figure 7 montre une vue optique agrandie de la mèche de cheveux. Il existe deux types de coloration des cheveux: les cheveux blonds et les cheveux roux. Ces deux types de cheveux sont enroulés (et attachés) avec un fil vert.
La figure 8 montre différents aspects des fibres constituant un tel fil. De couleur verte, les fibres sont longues et cylindriques, d'épaisseur régulière. La photographie SEM inférieure de la figure montre une extrémité de fibre, avec une extrémité bi-triangulaire caractéristique d'une fibre de soie. La figure 9 montre une partie d'une telle fibre (de 16 pm d'épaisseur) qui est lisse. Le spectre correspondant montre un pic principal de carbone, un petit pic d’oxygène et un très petit pic de soufre (ce dernier élément organique étant caractéristique de la soie).
Mais ce sont aussi de petits pics d’aluminium et de soufre dans le spectre. Comme pour le papier, la couleur verte des fibres de soie est due à un pigment vert organique lié à la soie par le mordant alun.
4. Les cheveux de la mèche.
Trois cheveux de chaque couleur ont été prélevés dans la mèche (Figure 10). Les figures suivantes résument les résultats obtenus concernant les cheveux les plus longs pour chaque catégorie.
La figure 11 montre les deux extrémités du cheveu roux numéro 1; elles correspondent à un cheveu coupé (la direction des échelles de point de chaque rangée permet d’orienter le cheveu). La photo SEM-1 de la figure 12 montre la partie médiane du cheveu, où l'épaisseur est de 65,5 pm. Sur cette photo, on peut voir que la distance moyenne entre les rangées d'échelles est d'environ 17 heures, caractéristique des cheveux humains (la surface des cheveux est recouverte de particules minérales). Le spectre montre les caractéristiques des pics de la composition des cheveux: deux pics (de matière organique) correspondant au carbone et à l'oxygène, un très petit pic d'azote et un pic constant de soufre (ponts de disulfure de la kératine); il y a du chlore et le sodium, correspondant au sel (ClNa) de la sueur. Un exemple de dépôt minéral sur la surface du cheveu est illustré à la figure 13; son spectre est celui d'une particule riche en fer (argile) à base d'alumine-silicate. Un nombre total de trente-deux de ces particules sont déposées à la surface des cheveux. La photographie de la figure 14 montre un autre exemple d'un autre type de dépôt de minéraux à la surface des cheveux; son spectre montre un pic principal relativement élevé de calcium (il s'agit donc de la calcite ou d'une autre forme de carbonate de calcium). Nous avons trouvé un nombre total de onze particules de ce type à la surface des cheveux. La figure 15 montre un exemple de partie de corps d'acari adhérant à la surface du cheveu (quatre de ces coquilles - ou fragments de coquille - ont été trouvées collées aux écailles). La surface du cheveu est multi-parasitée, car nous observons à la surface un embrayage d’arthropodes. Nous avons des preuves que ce type de cheveux a été traité avec du sulfate de fer (Figure 16), un produit phytosanitaire communément utilisé de formule chimique FeSO4. Nous avons également observé au moins quatre échantillons de Cyanophyca (Figure 17) parasitant la surface du cheveu.
La figure 18 montre les extrémités coupées du cheveu blond numéro 1. La photographie SEM-1 et le spectre de la figure 19 montrent que ce cheveu est, par son aspect et sa composition, un cheveu humain typique. Son diamètre dans la partie médiane est de 56,2 heures. Exploration de sa surface montre seulement deux particules d'argile et une particule de carbonate de calcium (nous ne trouvons aucun produit de sulfate de fer). La figure 20 montre une cellule cutanée adhérente, de même composition chimique que celle des squames du cheveu (mais se différenciant par une teneur en soufre relative inférieure et par la présence de phosphore). Un exemple de micel de savon est présenté sur la photographie au MEB de la figure 21 (sa composition est principalement composée de carbone et d'oxygène); nous avons trouvé six échantillons d'un tel produit à la surface des cheveux, ce qui atteste que ces cheveux ont été intensément lavés, savonnés et nettoyés. La photographie de la figure 22 montre un exemple d'un ensemble de particules métalliques (de sulfure d'argent, avec des traces de cuivre) qui sont chargées à la surface des cheveux (quatre ensembles d'un tel produit ont été trouvés). Cela atteste que les cheveux étaient finement argentés après le lavage. La figure 23 montre l'exemple unique d'un ensemble d'au moins trois particules (à contours angulaires) situées à la surface du cheveu. Comme ces structures sont très résistantes à un faisceau de rayons X intense (à la puissance maximale de l'appareil SEM) et que leurs compositions chimiques sont principalement de carbone, ce sont probablement des particules de micro-éclats de diamant.
Ainsi, les deux cheveux sont coupés; les deux sont similaires en aspect et en composition chimique, caractéristiques des cheveux humains. Le tableau 1 montre les points principaux par lesquels ils diffèrent.
Tableau 1: Principales différences entre les deux cheveux.
Cheveux roux Cheveux blonds
Epaisseur 65.5 μm 56.2 μm
Dépôts sur les écailles nombreux Un peu
Nombre de particules d’argile 32 2
Nombre de particules de carbonate de de calcium 11 1
Nombre de cellules de la peau aucune 1
Nombre d''acariens 4 aucun
Nombre d’embrayages d’insectes 1 aucun
Nombre de Cyanophycaes 4 aucun
Nombre de particules de FeSO4 6 aucun
Nombre de micels de savon aucun 6
Nombre de particules métalliques de sulfure d’argent aucun 4
Ensemble de micro-éclats de diamant aucun 3
Les deux sortes de cheveux emmêlés dans la mèche se différencient par leurs préparations: tandis que les cheveux blonds étaient soigneusement savonnés et lavés, puis décorés avec des matériaux précieux, les cheveux roux sont plus «indigènes» - car plus recouverts d'argile et de minéraux de carbonate de calcium et constituent une matière sale; les cheveux sont recouverts de restes d'arthropodes et infectés par certains Cyanophycaes (du sulfate de fer a été utilisé pour le traiter). Ces deux sortes de poils (poils rouges non lavés et poils blonds lavés et décorés) étaient en outre empêtrés dans la mèche de cheveux que nous observons.
Les figures suivantes montrent les cellules de la peau et les pellicules trouvées sur la surface du cheveu blond numéro 3. Ce cheveu, précédemment étudié, s'est révélé particulièrement riche en ces formations; ainsi, une procédure spéciale (sur SEM-2, dans LFD, 2400x) a été utilisée pour l’analyser plus précisément.
La figure 24 montre les premières cellules de peau trouvées; de taille relativement grande (environ 30 pm de longueur maximale), ces cellules sont aplaties et pliées longitudinalement. Leurs compositions sont à peu près les mêmes que celles des écailles des cheveux, mais avec du phosphore et une proportion relativement plus faible de soufre. La figure 25 montre les premières pellicules trouvées; De composition semblable à celle des cellules de la peau, il a une taille plus petite, une surface bombée et des contours bien délimités. Figure26 montre la deuxième pellicule observée, et la figure 27 les aspects des deux pellicules suivantes trouvés. L’exploration complète de la surface numéro 3 des cheveux blonds nous permet de détecter une trentaine de pellicules dessus.
Contrairement aux cellules de la peau, les pellicules sont des cellules multinucléées contenant des quantités appréciables d'ADN nucléaire et cytoplasmique (Lucotte et Bouin Wilkinson, 2014). C'est la raison pour laquelle nous avons extrait l'ADN génomique de l'ensemble des cheveux blonds, numéro 3.
5. ADN des cheveux blonds numéro 3.
Nous avons obtenu environ 39 ng d’ADN génomique à partir du numéro 3 des cheveux blonds. La procédure de détection des mutations de l’ADNmt a été répliquée deux fois. Le tableau 2 résume les résultats obtenus.
Tableau 2: Détection de mutations d'ADNmt.
Present study Lucotte et al., 2015
HVR1 sequence Pas de mutation Pas de mutation
HVR2 sequence 152C, 194T, 263G, 315.1C 152C, 194T, 263G, 315.1C
Il n'y a pas de mutation dans la séquence HVR1 et quatre mutations (152C, 194T, 263G et 315.1C) dans la séquence HVR2; ces mutations sont les mêmes que celles trouvées précédemment (Lucotte et c Crépin al., 2015) dans les autres cheveux authentiques de Louis XVII. Cette combinaison (parfois appelée à tort «l'haplotype des Habsbourg») a été initialement trouvée (Jehaes et al., 2001) chez certains descendants de
Nous avons récemment (Lucotte, en préparation) établi (pour les cheveux authentiques de Marie-Antoinette, conservés dans un médaillon) que l’haplogroupe d’ADNt correspondant est vraiment celui qui appartient à la reine Marie-Antoinette. La consultation de banques de données récentes a montré que cet haplogroupe d'ADNmt est rare (il a été trouvé chez moins de vingt sujets dans le monde).
La procédure de détection du profil Y-STR a également été répliquée deux fois. Le tableau 3 résume les résultats obtenus concernant ce profil.
Tableau 3. Détection des valeurs d'allèle pour quinze Y-STR.
Y-STRs Allele values
Present study Lucotte et al., 2016
DYS19 14 14
DYS385.a 11 11
DYS385.b 14 14
DYS389.I 14 14
DYS389.b 16 16
DYS390 23 23
DYS391 11 11
DYS392 13 13
DYS393 13 13
DYS438 12 12
Y-GATA-A4 13 13
DYS448 19 19
DYS456 16 16
DYS458 18 18
Y-GATA-C4 23 ?
Y-GATA-H4 12 12
Les valeurs d'allèle sont identiques pour quatorze Y-STR. Cela confirme que Louis XVII est vraiment le fils de Louis XVI.
DISCUSSION ET CONCLUSION
Nous avons travaillé sur une mèche de cheveux conservée dans une lettre qui, accompagnée d’une bague enchevêtrée avec les cheveux de Marie-Antoinette, a été donnée à la marquise de Soucy (née de Makau). La lettre a été transmise par héritage au à la descendance des Soucy d’aujourd'hui.. Les analyses SEM-EDX du papier à lettres ont montré qu’il s’agissait d’un type particulier de "papier mousseline ”, constituée principalement de fibres de lin; l'encre de l'inscription sur le papier était une sorte particulière d'encre à base de ferro-gallic. Ces deux matériaux sont compatibles avec ceux d'une lettre écrite au 18ème siècle.
La mèche de cheveux conservée dans la lettre est entourée et attachée par un précieux fil de soie verte. Il y a deux sortes de poils dans la mèche concernant la couleur: les cheveux roux et les cheveux blonds. Cela indique que la mèche de cheveux est constituée par les cheveux de deux sujets différents.
Les deux types de cheveux diffèrent aussi par leurs diamètres: une épaisseur de 65,5 μm pour un cheveux roux (les cheveux rouges numéro 1 étant pris pour exemple) et de 56,2 μm pour un cheveux blonds (cheveux blonds numéro 1 étant pris comme exemple). ). Le diamètre principal d'un cheveu adulte normal est d'environ 80 μm (Deedrick et Koch, 2014), et la dessiccation (comme pour les cheveux étudiés ici) n'est responsable que d'une réduction limitée de cette épaisseur. Une épaisseur de cheveux de 65,5 μm (correspondant à l'augmentation normale du diamètre des cheveux pendant la croissance) est évocatrice de celle d'un adolescent, et une épaisseur de cheveux de 56,2 μm de celle d'un sujet plus jeune.
La différenciation de couleur de cheveux, en soi, doit également être prise en compte: nous savons que la couleur des cheveux du jeune Louis-Charles était blonde, tandis que sa sœur aînée Marie-Thérèse (1778-1851) avait les cheveux roux, ou plus exactement (tout comme sa mère, Marie-Antoine) «blond-cendre»
.
Les deux types de coloration des cheveux sont également importants à considérer. Nous pensons que ces deux colorations ne correspondent qu’à deux sujets (l’inscription au pluriel «Cheveux des Augustes enfants de France» indique qu’ils n’étaient que deux), dont les cheveux sont dans la mèche: ces deux sujets sont Louis-Charles et Marie-Thérèse Le premier dauphin Louis-Joseph (né en 1781) est décédé en 1789 et le dernier enfant Sophie (née en 1786) est décédé un an après. Comme Marie-Antoinette avait donné l'anneau (et les cheveux) à Renée de Soucy en 1792, les deux enfants survivants étaient en vie à ce moment-là.
Nous avons établi que, contrairement aux cheveux roux, les cheveux blonds étaient soigneusement préparés (lavés, savonnés et décorés); ces deux sortes de cheveux étaient, en second lieu, entrelacées dans la mèche. Il s’agit d’un ancien processus habituel d’embrassement des cheveux chez les personnes qui sont étroitement liées affectivement et / ou familièrement; par exemple (Lucotte et al., 2016), nous avons observé que les cheveux de Louis XVI et ceux de son épouse Marie-Antoinette sont ainsi entrelacées dans la mèche de cheveux étudiée.
Nous avons observé que les cheveux blonds numéro 3 sont particulièrement chargés de cellules cutanées et de pellicules étroitement liées à leur surface. Une quantité suffisante d'ADN en a été extraite; les mutations d’ADNt détectées correspondent à un haplogroupe d’ADNt identique à celui obtenu à partir des cheveux authentiques d’un autre Louis XVII (Lucotte et C Crépin al., 2015) et de Marie-Antoinette.
Le profil Y-STR obtenu est strictement identique à celui de Louis XVI (Lucotte et al., 2016). Ceci établit que Louis XVI est le père biologique de Louis XVII.
Depuis le début, de nombreuses rumeurs ont mis en doute la paternité de ses enfants par Louis XVI. Nous démontrons ici que Louis-Charles (Louis XVII) est vraiment le fils de Louis XVI.
Remerciements
Nous remercions les frères de Baudreuil qui nous ont permis d’étudier la mèche de cheveux, et Arnaud de Genlis pour sa généalogie complète de la famille de Soucy. Cette étude fait partie de notre programme de recherche sur les enquêtes génétiques mis au point à l’Institut d’anthropologie moléculaire (Paris) concernant les familles royales en France.
Références
1. D.W. Deedrick et S.L. Koch (2014). Microscopie des cheveux, Partie 1: Guide pratique et manuel sur les cheveux. Forensic Science Communications, 6: 1-45.
2. E. Jehaes, H. Pfeiffer, K. Toprak, R. Decorte, B. Brinkmann et J.J. Cassiman (2001). Analyse ADN mitochondriale du cœur putatif de Louis XVII, fils de Louis XVI et de Marie-Antoinette. European Journal of Human Genetics, 9: 185-190.
3. G. Lucotte (2010). Une variante rare de la séquence de l’ADNmt HVS1 dans les cheveux de la famille de Napoléon. Investigative Genetics, 1 (7): 1 -6.
4. G. Lucotte et A. Bouin Wilkinson (2014). Un profil STR autosomique de Napoléon Ier. Open Journal of Genetics, 4: 292-299.
5. G. Lucotte, T. Thomasset et C. Crepin (2015). Le mitotype d'ADN mitochondrial de Louis XVII (1785-1795?). Journal international des sciences, 4 (11): 10-18.
6. G. Lucotte, T. Thomasset et S. Wen (2016). Le profil ADN Y-STR de Louis XVI (1754-1793). International Journal of Sciences, 5 (04): 68-93.
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correctif
Lun 4 Mar - 13:25
Par ailleurs les 3 micro-éclats de diamant trouvés dans les cheveux de Louis XVII prouvent aussi que ces cheveux sont ceux de Louis XVII futur roi de France. Sa sœur qui n’était pas destinée à être reine n’en n’ a pas. D’après le Professeur Lucotte ,Napoléon 1er avait aussi des éclats de diamant dans ses cheveux.
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